استاندارد روش اندازه‏گیری اوره و ازت آمونیاكی در خوراك دام و طیور

  1 ـ هدف

 هدف از تدوین این استاندارد تعیین روشهای اندازه‏گیری اوره و ازت آمونیاكی در خوراك دام و طیور می‏باشد .

  2 ـ دامنه كاربرد

 این استاندارد جهت اندازه‏گیری اوره و ازت آمونیاكی در خوراك دام و طیور كاربرد دارد .

  3 ـ نمونه‏برداری

 طبق استانداردهای روش نمونه‏برداری در مواد غذائی عمل شود .

  4 ـ روش كار

 4-1- اندازه‏گیری اوره به طریق اسپكتروفتومتری

 4-1-1- وسایل مورد نیاز

 ـ اسپكتروفتومتر با حداكثر باند 2/4 در طول موج 420^nm با سلهای یك سانتیمتری

 4-1-2- معرفها و مواد مورد نیاز :

 4-1-2-1- محلول پارادی متیل آمینوبنزالدئید ¹

 16 گرم پارادی متیل آمینو بنزالدئید را در یك لیتر الكل و 100 میلی‏لیتر اسید كلریدریك حل نمائید . این محلول برای یك ماده پایدار می‏ماند .

 4-1-2-2- اسید استیك

 4-1-2-3- محلول استات روی : 22 گرم استات روی 2H2O₂(,OAC)Zn را در آب حل كرده و 3 میلی‏لیتر اسید استیك بآن اضافه نمائید سپس آن را تا حجم 100 میلی‏لیتر رقیق نمائید .

 4-1-2-4- محلول فروسیانور پتاسیم : 10/6 گرم فروسیانور پتاسیم ₆  3H2O(,CN) K₂Fe را در آب حل كرده و به حجم 100 میلی‏لیتر برسانید .

 4-1-2-5- زغال اكتیو ـ (60 - G)

 4-1-2-6- محلول بافر فسفات با 7 = PH

 4-1-2-7- محلولهای استاندارد اوره :

 الف : محلول استاندارد اولیه با غلظت 5ml/mg

 5 گرم اوره را با دقت یك میلی‏گرم در آب حل كرده و سپس آن را تا حجم یك لیتر برسانید .

 ب : محلولهای استاندارد مورد استفاده با غلظتهای 0/2 , 0/4 , 0/6 , 0/8 , 1 , 1/2 , 1/4 , 1/6 , 1/8 و 2 میلی‏گرم اوره در 5 میلی‏لیتر : به ترتیب 2,4,6,8,10,12,14,16,18,20 میلی‏لیتر از محلول اولیه (5ml/mg) را برداشته و در بالن ژوژه‏های 50 میلی‏لیتری ریخته و هر كدام را با محلول بافر فسفات 7 به حجم برسانید .

 ج : محلول مرجع : محلول اوره استاندارد با غلظت 1/mg5ml را كه بشرح فوق تهیه گردیده بعنوان استاندارد مرجع بكار ببرید . این محلول در حرارت كمتر از 24 درجه سلسیوس به مدت یك هفته ثابت می‏ماند .

 4-1-3- رسم منحنی استاندارد اوره :

 از هر یك از محلولهای استاندارد اوره ( طبق بند ب ) 5 میلی‏لیتر برداشته و در لوله‏های 25 میلی‏لیتری ریخته و به هر كدام 5 میلی‏لیتر محلول DMAB اضافه نمائید و یك محلول شاهد نیز حاوی 5 میلی‏لیتر محلول بافر 7 باضافه 5 میلی‏لیتر محلول DMAB تهیه نمائید . لوله‏ها را كاملا تكان داده و بگذارید 10 دقیقه در بن ماری 25 درجه سلسیوس بماند . سپس جذب هر یك از محلول‏ها را در طول موج 420^nm با استفاده از سلهای یك سانتیمتری در مقابل شاهد ( با جذب صفر ) بخوانید . آنگاه میزان جذب محلولها را در مقابل غلظت‏ها رسم نمائید . منحنی بدست آمده بایستی به صورت خط راست باشد در غیر این صورت آزمایش بایستی تكرار شده و محلول DMAB نیز تازه تهیه گردد .

 4-1-4- روش اندازه‏گیری نمونه :

 یك گرم از نمونه آسیاب شده را وزن نموده و در یك بالن ژوژه 500 میلی‏لیتری ریخته و بآن یك گرم زغال اكتیو و حدود 250 میلی‏لیتر آب , 5 میلی‏لیتر محلول استات روی و 5 میلی‏لیتر محلول فروسیانور پتاسیم اضافه نمائید . سپس مخلوط را به مدت 30 دقیقه كاملا با تكان دهنده تكان دهید و پس از آن حجم آن را با آب به 500 میلی‏لیتر برسانید . آنگاه بگذارید بماند تا رسوب ته نشین گردد . سپس آن را با استفاده از كاغذ صافی واتمن شماره 40 صاف كرده بطوریكه محلول صاف شده كاملاؤ شفاف باشد .

 5 میلی‏لیتر از محلول صاف شده را در یك لوله آزمایش ریخته و بآن 5 میلی‏لیتر محلول DMAB اضافه كرده و كاملا تكان دهید . همراه با نمونه یك محلول استاندارد مرجع ( طبق بند ج ) و یك محلول شاهد نیز تهیه نموده و آنها را در بن‏ماری با حرارت 25 درجه سلسیوس به مدت 10 دقیقه قرار دهید سپس میزان جذب نمونه و استاندارد را در مقابل شاهد در طول موج 420^nm قرائت نموده و درصد اوره را طبق فرمول زیر محاسبه نمائید .

 = درصد اوره

A₁ = میزان جذب استاندارد مرجع

 W = وزن نمونه بر حسب میلی‏گرم در حجم مورد آزمایش می‏باشد .

 4-2- روش اندازه‏گیری ازت اوره‏ای و آمونیاكی در خوراك دام و طیور

 4-2-1- وسایل مورد نیاز

 ـ بالنهای كجدال با ظرفیت 500 میلی‏لیتر

 4-2-2- معرفها و مواد مورد نیاز

 4-2-2-1- محلول ضد كف

 4-2-2-2- محلول كلرور كلسیم :

 25 گرم كلرور كلسیم ( CaCl₂ ) را در 100 میلی‏لیتر آب حل نمائید .

 4-2-2-3- معرف متیل رد :

 یك گرم متیل رد را در 200 میلی‏لیتر الكل حل نمائید .

 4-2-2-4- اسید كلریدریك  نرمال

 4-2-2-5- محلول سود  نرمال

 4-2-2-6- اوره خالص به فرمول شیمیائی ₂(NH2)Co)

 4-2-2-7- محلول اوره آز :

 محلول تازه اوره آز در آب را با غلظتی تهیه كنید كه هر 10 میلی‏لیتر محلول خنثی اوره آز , ازت موجود در 0/1 گرم یا بیشتر اوره خالص را تغییر دهد . برای این منظور باید ابتدا میزان قلیائیت و همچنین فعالیت آنزیم اوره آز تعیین گردد .

 الف : تعیین قلیائیت محلول اوره آز

 میزان قلیائیت اوره آز تجارتی را بشرح زیر تعیین نمائید .